四維士乛工一口寸金真

一般PCR的主要用途有兩種：確認基因是否存在 和 把基因調出樣本。前者可用於鑑定基因型，加上引子與實驗條件如果設計得夠好，還能直接鑑定品種，如新冠病毒的鑑定。後者主要用於克隆基因，這在生技公司的基因合成服務再進一步降價之前，仍然是取得基因CP值最高的方法。

檢量線，也有人稱標準曲線，是用來推算樣本中某種物質含量的方程式。首先，你需要有能夠分析該物資的方法，如HPLC、染劑呈色或酵素呈色法都好，只要得到的「數值」能夠與「標的物濃度」成「線性關係」，就能夠繪製可供檢量用的方程式線。各版本的Excel功能都差不多，但是有些選項的位置會不一...

是！因為國民教育的關係，一般我們對「酸」的了解都來自於一些常見的酸，如醋酸、鹽酸與硫酸。在我們印象中，酸的特徵就是液態、低pH值、有腐蝕性等等。但生化課本裡的有機酸，如氨基酸、琥珀酸、蘋果酸不等的純品，其實是固態粉末⋯。那藥品罐上寫了氨基酸，溶到水裡就一定會讓溶液變酸嗎？

由於微量天秤的運作原理是「壓電效應」，意謂著施加的垂直正向力越高，他的讀值就會跟著變高。也因此，微量天秤上需要有一個水平儀來確認整臺天秤的擺放是否水平，以完整地垂直接收藥品的重量，這樣秤出來的才準確。我試過，光是把儀器調成水平，讀值就能差了25mg，這對我們常常要只秤個10mg的人來說，可是天壤之別。

這是一個化學系學妹教我的，原來有商用軟體能夠幫你計算要秤多少克的藥來配製各種濃度、pH值的化學溶液。由於年代久遠，我早就忘了那軟體姓啥名誰了。而如果要自己算的話，就要找出藥品的pKa，然後用亨德森-哈塞爾巴爾赫方程式（Henderson-Hasselbalch equation）如圖來計算（可以不要嗎？

微量吸管，我習慣都叫pipette，是在1957年由馬堡（Marburg, Germany)的醫生，海因里希·施尼特格爾 （Dr. Heinrich Schnitger）所發明。為了這篇我還去找了是不是有正式的中文名稱，結果似乎沒有⋯有叫移液器、注液器、微量吸管、吸量管等等，總之...

試著拍了常用莫爾濃度計算的說明影片，之後打算慢慢把實驗室常用技術整理放上來，然後加上影片演示說明，希望對大家有幫助，有任何建議也歡迎指教哦～ 影片連結：https://youtu.be/DLD_fUKUzEE

圖片來源：https://www.facebook.com/photo/?fbid=255339366768909&set=a.102160262086821

另有中文版(https://reurl.cc/dLERVz、https://reurl.cc/97jMbx)

取 50 μL 的 K. marxianus 酵母菌殖入 5 mL 的 YPD 中，於 30oC 震盪 200 rpm 培養 12~16 小時。測其1/100濃度之O.D.600值，計算植入菌液50 mL YPD後O.D.600為0.2之量，再植菌。

先配500 ml 1 M Tris （60.57 g in 500 ml ddH2O)加入5N HCl調整pH值調到pH 8.5時取出30 ml（得到1 M Tris-HCl, pH 8.5)調到pH 8.0時取出30 ml （得到1 M Tris-HCl, pH 8.0)以此類...

把下面的表格列印出來後護貝或用透明膠帶包起來，在上面滴DNA loading dye超好用~~

Target: 16s rRNA genePrimer E8F: AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGPrimer U1510R: CGG TTA CCT TGT TAC GAC TTExpected product size: ~1500 bps For Taq...

這是用來進行DNA熱休克轉型用的大腸桿菌勝任細胞(Competent Cell)製備方法，今天才發現原來我一直都沒有發過... 所需材料：1. 大腸桿菌 (不限於DH5α或JM109)2. Lysogeny broth (LB) agar培養盤3.

注意：第一次使用必須有前輩在場指導 1.預約使用時間，登記機器的旋轉里程數，打開總開關與離心機電源2.使用時先開真空（vacuum)暖機30分鐘3.拿SW 41的吊籃，連同SW 41的超高速離心管一起用微量天秤秤重4.重量必須兩兩平衡，且差異小於10mg: 1號籃與4號籃平衡、2...

1.依目的決定啟動子a.純化蛋白質我常用的純化方式是His-tag/Ni-NTA。在蛋白質胜肽鏈之前或之後接上六個Histidine胺基酸，用來與Ni-NTA管柱裡的鎳結合，可簡單將大部分的雜蛋白質分離。通常不影響酵素活性，然複合次單元的蛋白質要考慮其結構特性，不能影響活性複合體的結合。

實驗流程與細節： 1.用RF-Cloning網站(https://www.rf-cloning.org)設計引子，並令用來合成出「含有DNA片段的載體」區域的Tm值大於攝氏59度。然後紀錄第二次PCR需要的延長時間。2.在下訂單購買長於40碼的引子時，記得一定要買PAGE純化的，以減少錯誤率。

在一般的載體構築實驗裡，這是我最喜愛的方法。因為不用像限制酶-接合酶法那樣一個一個傷腦筋地去找單一切位，然後再去翻箱倒櫃看實驗室有沒有那些限制酶存貨或為了某一個特殊的切位去買一個可能以後都用不到的限制酶。而且還可辦到那——瀟灑不留任何限制酶切位的「無痕構築(scar-less construction)」。

Plan B 單限制酶切 如果實在是經費不足，或你的基因DNA序列就是那麼地容易被各種限制酶傷害，你只找得到一種真命限制酶來切接，那就得再額外求助於蝦蝦鹼性磷酸酶 （Shrimp Alkaline Phosphatase）來處理切好的質體了！

在接合載體片段（vector)與插入片段(insert)的時候，通常都是用莫爾數比1:3（vector:insert)來調配反應比例。在20µl的接合反應裡，載體片段我會固定使用50ng，再去計算需要的插入片段質量。簡單算法為50乘以3、再乘以插入片段的bps長度、再除以載體的bps長度，即可算出需要的插入片段質量。